소아 암연관 중간엽줄기세포의 분리 및 특성

소아 암연관 중간엽줄기세포의 분리 및 특성

Isolation and characteristics of cancer-associated mesenchymal stem cell in childhood leukemia.

(구연):
Release Date : 2014. 10. 24(금)
Chun Woo Lim, Jung Sook Yeom, Ji Sook Park, Eun-Sil Park, Ji-Hyun Seo, Jae-Young Lim, Chan-Hoo Park, Hyang-Ok Woo , Hee-Shang Youn
Gyeongsang National University Hospital Departments of Pediatrics1
임춘우, 염정숙, 박지숙, 박은실, 서지현, 임재영, 박찬후, 우향옥 , 윤희상
경상대학교병원 소아청소년과학교실1

Abstract

서론: 암을 둘러싸는 환경은 암세포, 암줄기세포, 암연관 중간엽줄기세포,면역세포등등 이외에도 많은 세포들로 둘러싸여 있다. 효과적인 암세포치료를 해도 재발하는 이유가 이러한 암을 둘러싸는 환경의 나머지 세포들을 조절하지 못해서 그렇다는 연구들에 대한 증거들이 증가하고 있다. 이미 성인 고형암의 연구에서 암연관 중간엽줄기세포가 암의 증식과 전이를 증가시킨다는 보고들이 증가하고 있다. 하여 본 저자들은 암연관 즐기세포를 분리하여 이제까지 연구된바없는 암연관 중간엽줄기세포의 면역학적 기능을 연구하고자 하였다. 방법: 2013년 8월부터 2014년 6월까지 본 원에 내원한 AML7,AML1,CML환아 각각 한명씩의 골수에서 5cc의 골수에서 암연관 중간엽줄기세포를 분리하여 BD에서 구입한 성인 골수 유래 중간엽줄기세포와 PCR과 ELISA를 이용하여 면역기능을 측정하고 줄기세포인지 알기위해FACS를 MAPK의 activation을 알기위해서는 western을 사용하였다.시험관 실험으로 THP-1암의 증식과 migration을 보기위해 transwell 실험을 시행하였다. 결과: 골수에서 분리한 세포들의 P2-P3정도에서 FACS를 시행하여 이 세포들이 CD117,HLA-DR,CD33/CD34가 음성이고 CD73/CD90/CD44에서 강양성이었고 생긴모양이 길쭉길쭉한 섬유모세포처럼 보였다. 면역세포로서의 기능을 알아보기위해 PCR를 시행하였는데 THP-1세포가 TLR2와 TLR4가 모두 발현되는 비해 암연관 중간엽줄기세포는 TLR2는 발현되지만 TLR4는 발현되지않았습니다. LPS로 자극을 주었을 때 암연관 중간엽줄기세포 모두 MAPK가 activation되었습니다. IL6, TNF,VEFG 등의 cytokine의 농도가 성인골수유래 줄기세포에 비해 암연관 중간엽줄기세포가 약간높았지만 특이하게도 IL8이 10배가량 높았습니다. 반대로 IL-10은 LPS의 자극에 의해 농도가 감소하였고 자극이 없는 상태에서 암연관 중간엽줄기세포가 4배가량 떨어져 있었다. THP-1암의 증식은 암연관 중간엽줄기세포존재시에 증가하였고 과 migration도 암연관 중간엽줄기세포에도 증가하였다. 결론: 이번 연구를 통해 암연관 중간엽줄기세포의 면역학적 기능이 정상적인 골수유래 줄기세포에 비해 매우 비정상으로 활성화 되어 있음을 밝혔으며 암의 증식과 전이에 관여하는 것을 밝혔으므로 이러한 사실은 새로운 암치료 타겟을 암연관 중간엽줄기세포로 해야된다는 증거로 제시하는 바이다.

Keywords: cancer-associated mesenchymal stem cell, leukemia, childhood